rtpcr原理及應用是什麼

原理是：萃取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA為模板，以Oligo（dT）或隨機引子利用逆轉錄酶逆轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增，而獲得目的基因或檢測基因表現。

此技術主要用於：分析基因的轉錄產物、獲取目的基因、合成cDNA探針、建構RNA高效轉錄系統。

RT- PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction）即逆轉錄PCR，是將RNA的逆轉錄（RT）和cDNA的聚合酶鍊式擴增（PCR）結合的技術。

首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，並擴增合成目的片段。 RT-PCR技術靈敏且用途廣泛，可用於檢測細胞中基因表現水平，細胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。

作為模板的RNA可以是總RNA、mRNA或體外轉錄的RNA產物。無論使用何種RNA，關鍵在於確保RNA中無RNA酶和基因組 DNA的污染。

用於反轉錄的引子視覺實驗的具體情況選擇隨機引子、Oligo dT 及基因特異性引子中的一種。對於短的不具有發卡結構的真核細胞mRNA，三種都可。

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