rtPCRの原理と応用は何ですか

原理は、組織または細胞から全 RNA を抽出し、その中の mRNA を鋳型として使用し、オリゴ (dT) またはランダム プライマーを使用して cDNA に逆転写酵素を使用することです。次に、cDNA を PCR 増幅のテンプレートとして使用して、標的遺伝子を取得するか、遺伝子発現を検出します。

この技術は主に、遺伝子転写産物の分析、標的遺伝子の取得、cDNAプローブの合成、効率的なRNA転写システムの構築に使用されます。

RT-PCR (逆転写ポリメラーゼ連鎖反応) は、RNA 逆転写 (RT) と cDNA ポリメラーゼ連鎖増幅 (PCR) を組み合わせた技術です。

まず、逆転写酵素の作用によりRNAからcDNAが合成され、それを鋳型として目的の断片を増幅・合成します。 RT-PCR 技術は高感度で多用途であり、細胞内の遺伝子発現レベルや細胞内の RNA ウイルスの内容を検出したり、特定の遺伝子の cDNA 配列を直接クローン化するために使用できます。

鋳型として使用される RNA は、トータル RNA、mRNA、またはインビトロ転写された RNA 産物です。使用する RNA の種類に関係なく、重要なのは、RNA に RNase やゲノム DNA の汚染がないことを確認することです。

逆転写に使用するプライマーは、実験条件に応じてランダムプライマー、オリゴdT、遺伝子特異的プライマーから選択できます。ヘアピン構造を持たない短い真核細胞 mRNA の場合は、3 つすべてが利用可能です。

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